小核酸药物的毒性病理案例（三）

固定液对海马神经元空泡化的影响，其中非人灵长类动物通过鞘内途径给药6周剂量的5mg反义寡核苷酸（ASO）。

（A） 海马浸没固定在中性缓冲福尔马林（NBF）中，神经元出现大泡空泡化。相比之下，海马中没有观察到空泡化，浸没固定在Carnoy（B）中，灌注固定在改良的Karnovsky（C）中，或在冷冻切片检查的未固定冷冻组织中（D）

（A） 肝细胞有丝分裂（白箭头）和轻度凋亡/单细胞坏死（黑箭头），  Aso3（毒理高剂量）40mg/kg. （B），严重凋亡/单细胞坏死（箭头），Aso3-G，20mg/kg.

（C）肾脏：肾小管变性（箭头）和单核炎性浸润（箭头），3剂Aso3（HT），40mg/kg .（D）肾脏：与用溶对照给药的大鼠未受影响的肾脏。

（E） 注射部位（皮肤、肩胛间区）：单核炎性浸润.（F）脾脏：淋巴细胞凋亡和淋巴滤泡增生

细胞死亡机制和增殖。Casp3、KIM-1的免疫组织化学染色实例

在给予Aso3-G毒理高剂量后，肝脏中观察到最高的Casp-3信号，表明细胞死亡是凋亡的机制。

然而，在肾脏中，ASO给药Casp与对照组大鼠相比，Casp-3的表达没有差异。

化合物（Aso3和Aso3-G）在给予HT的大鼠肝脏中观察到Ki67增殖细胞数量增加（主要在肝细胞中）。Aso3（HT）在近端肾小管上皮细胞中表现出最高的KIM-1信号，这表明肾小管坏死。

肝脏和肾脏中的炎性细胞。巨噬细胞（Iba1）以及T细胞（CD3）-免疫组织化学染色图片。

更高的Iba1细胞计数（枯否细胞）与HT ASO一起在肝脏中观察到，HT ASO。

插图代表凋亡小体被Iba1细胞吞噬。在肾脏中，Aso3（HT）的含量最高间质单核细胞浸润量，由大量巨噬细胞（Iba1）和较低比例的T淋巴细胞（CD3）

免疫组织化学（IHC）以及原位杂交（ISH））定位的代表性图片

含LNA的ASO在肝脏和肾脏中的积聚。在肝脏中，裸ASO主要积聚在枯否细胞中（箭头），在肝细胞内的水平非常低。

GalNAc偶联的ASO不仅在枯否细胞内积累（箭头），而且在肝细胞内也累积（箭头）。在肾脏中，所有LNAs主要在近端肾小管上皮细胞中积累，与它们的结合状态无关（箭头）

反义寡核苷酸（LNA-ASO）治疗组（ASO-2W）用（A）10%中性粒细胞缓冲液固定肾脏甲醛溶液（NBF）、（B）Karnovsky固定剂或（C）4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液（PFA）。

（D） 免疫组织化学用10%NBF固定肾脏的ASO-2W肾损伤分子-1（KIM-1）染色。

1周LNA ASO治疗组（ASO-1W）用（E）10%NBF和（F）Karnovsky固定剂固定肾脏。免疫组织化学用10%NBF固定的肾脏的（G）ASO-1W和（H）ASO-2W的溶酶体相关膜蛋白2（LAMP-2）染色。

(A) 在近端小管中观察到嗜碱性粒细胞（黑色箭头）和空泡（黑色箭头。）（B） 未观察到空泡，但观察到嗜碱性颗粒（黑色箭头）。H&E染色。(C） 观察到嗜碱性颗粒（黑色箭头）和空泡（黑色箭头”）。。

（D）大多数空泡化近端小管是KIM-1阴性。（E，F）在近端小管中观察到的一些空泡含有微弱的嗜碱性颗粒（绿色箭头）。嗜碱性颗粒清晰可见，细胞结构得以保留（绿色箭头）。（G，H）空泡的膜表面对LAMP-2呈阳性（蓝色箭头）。

参考文献

Toxicologic Pathology 2018, Vol. 46(7) 735-745

NATURE COMMUNICATIONS | (2018) 9:723

Toxicologic Pathology 2021, Vol. 49(6) 1174-1192

Toxicologic Pathology, XX: 1-12, 2014

Toxicologic Pathology, XX: 1-10, 2015

Toxicologic Pathology2022, Vol. 50(2) 197–210

Toxicologic Pathology2021, Vol. 49(6) 1174-1192

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